Upute za ugradnju klizača
Prije nego što započnete postupak pripreme dijapozitiva, osigurajte da ste prikupili sve potrebne materijale, uključujući slajdove, prekrivačke klizače, kapljice ili cijevi i sve kemikalije ili mrlje koje namjeravate koristiti.
Postoje dvije glavne vrste dijapozitiva s kojima ćete raditi:
1. Standardni ravni stakleni tobogan.
2. Depresija ili kliznik, koji u središtu ima malu bušotinu ili uvlačenje dizajnirano za držanje kapljice vode ili tekuće tvari. Obično su cjenovni i obično se koriste bez poklopca.
Standardni dijapozitivi mogu se izrađivati od plastike ili stakla, veličine 1 x 3 inča (25 x 75 mm) i debljine 1 do 1,2 mm.
Za vlažne tobogane neophodni je poklopac ili staklo s poklopcem. Ovo je ultra tanki, kvadratni komad stakla (ili plastike) koji je pažljivo postavljen preko kapi uzorka. Bez pokrova, površinska napetost uzrokovala bi da kapljica formira oblik kupole. Poklopac suprotstavlja ovu napetost, osiguravajući da uzorak leži ravan za precizno ispitivanje s minimalnim fokusiranjem. Nadalje, naslovnica djeluje kao zaštita, sprječavajući da se objektivna leća ometa s padom uzorka.
Nosači klizača mikroskopa
Nosači mikroskopa odnose se na metode koje se koriste za osiguranje dijapozitiva mikroskopa ili uzoraka za promatranje. Postoje prvenstveno četiri vrste:
1. Slide nosači:To su najčešći tip i uključuju postavljanje uzorka na ravni stakleni tobogan, često pomoću montažnog medija (poput tekućine ili gela) kako bi ga držao na mjestu. Zatim se dodaje poklopac za zaštitu uzorka i pruža ravnu površinu za gledanje.
2. Šupljina ili bunari nosači:Ovi dijapozitivi imaju malu bušotinu ili depresiju u sredini, dizajnirani za držanje kapljice tekućine, poput vode ili specijalizirane tekućine za ugradnju. Koriste se pri radu s uzorcima koji zahtijevaju uranjanje u tekućinu.
3. Privremeni nosači:Ovi nosači nisu namijenjeni dugotrajnom skladištu ili promatranju. Uključuju jednostavne i brze metode poput postavljanja uzorka na tobogan s kapljicom vode. Često se koriste za promatranje živih organizama ili vremenski osjetljivih uzoraka.
4. Stalni nosači:Oni su dizajnirani za dugoročno skladištenje i promatranje. Uključuju složenije postupke, uključujući upotrebu specijaliziranih montažnih medija koji se s vremenom stvrdnuta, inkapsulira uzorak u prozirni medij. Ova vrsta nosača često se koristi za obrazovne dijapozitive i znanstvena istraživanja.
Svaka vrsta nosača ima svoje specifične primjene i odabire se na temelju prirode uzorka i svrhe promatranja.
Četiri uobičajena načina montiranja klizača mikroskopa
Postoji nekoliko uobičajenih metoda za postavljanje klizača mikroskopa, ovisno o vrsti uzorka i svrsi promatranja. Evo četiri uobičajena načina za montiranje klizača mikroskopa:
Suha montaža:
Postupak: U ovoj se metodi uzorak postavlja izravno na čisti klizač suhog mikroskopa. Često se koristi za uzorke koji ne zahtijevaju dodatnu vlagu ili uranjanje u tekućinu.
Primjene: Suha montaža je prikladna za promatranje čvrstih uzoraka poput biljnih dijelova, kose ili minerala.
Mokra montaža:
Postupak: Mali kap tekućine (obično voda ili specijalizirana tekućina za ugradnju) postavlja se na klizač, a uzorak se zatim dodaje ovom kapljici. Poklopac se nježno postavlja preko uzorka kako bi se spriječilo sušenje i izobličenje.
Primjene: Mokri nosači koriste se za promatranje živih organizama, stanica ili uzoraka koji zahtijevaju uranjanje u tekućinu.
Montaža tikvica:
Postupak: Ova tehnika uključuje postavljanje uzorka na klizač, a zatim ga lagano pritiskanje s poklopcem ili drugom klizačem kako biste ga spljoštili. To se obično koristi za meka tkiva ili osjetljive biljne dijelove kako bi se stvorio tanak, prozirni sloj za promatranje.
Primjene: Nosači tikvica koriste se za ispitivanje tkiva, posebno u biologiji biljaka.
Montaža razmaza:
Postupak: Mala količina uzorka (obično tekuća ili polu-tekuća tvari) širi se tanko i ravnomjerno na klizaču, često koristeći rub drugog tobogana. Tada je dopušteno da se suši zrakom ili se može fiksirati kemijskim agensom.
Primjene: Nosači razmaza obično se koriste za promatranje mikroorganizama poput bakterija ili za pripremu mrlje krvi za mikroskopiju.
Ove metode zadovoljavaju različite vrste uzoraka i njihove specifične zahtjeve za promatranje. Izbor tehnike montiranja ovisi o čimbenicima kao što su priroda uzorka, svrha promatranja i željena razina detalja i jasnoće.
Mrlje od mikroskopa
Mrlje od mikroskopa, također poznate kao biološke mrlje ili boje, su tvari koje se koriste u mikroskopiji za poboljšanje kontrasta i vidljivosti bioloških uzoraka. Djeluju selektivnim vezanjem na specifične stanične komponente, poput proteina, nukleinskih kiselina ili lipida, što omogućava lakšu vizualizaciju i diferencijaciju staničnih struktura. Evo nekoliko uobičajenih vrsta mrlja od mikroskopa:
1. hematoksilin i eozin (H&E):
Vrsta: kombinirana mrlja.
Upotreba: Jedna od najčešće korištenih mrlja u histologiji, hematoksilin mrlje stanične jezgre plavo-ljubičasto, dok eozin mrlje citoplazmu i neke izvanstanične strukture ružičaste.
2. Metilen plava:
Vrsta: Osnovna boja.
Upotreba: mrlje stanične jezgre plave boje. Obično se koristi za opće studije citologije i mikrobiologije.
3. Giemsa:
Vrsta: kombinirana mrlja.
Upotreba: Koristi se za bojenje krvnih stanica, razlikuje nuklearne i citoplazmatske komponente u različitim bojama, omogućujući identifikaciju različitih tipova stanica.
4. Gram mrlja:
Vrsta: kombinirana mrlja.
Upotreba: razlikuje dvije glavne kategorije bakterija: Gram-pozitivne (koje zadržavaju kristalnu ljubičastu mrlju) i gram-negativne (koje zauzimaju kontrastu od safranina).
5. Wrightova mrlja:
Vrsta: kombinirana mrlja.
Upotreba: prvenstveno koja se koristi za mrlje krvi, ova mrlja omogućava diferencijaciju vrsta krvnih stanica i identifikaciju abnormalnosti.
6. Lugolov jod:
Vrsta: mrlja na bazi joda.
Upotreba: Koristi se zajedno s GRAM -ovim jodom, može se koristiti za poboljšanje kontrasta određenih staničnih struktura.
7. Ulja crvena o:
Vrsta: lipofilna boja.
Upotreba: veže se posebno na lipide, što je korisno za bojenje struktura poput kapljica masti unutar stanica.
8. Periodična kiselina-Schiff (PAS):
Vrsta: mrlja na bazi kemijske reakcije.
Upotreba: reagira s ugljikohidratima, ističući strukture poput glikogena, mucina i drugih glikoproteina.
9. Toluidin plava:
Vrsta: Osnovna boja.
Upotreba: mrlje kisele komponente u stanicama i tkivima, uključujući granule mastocita i nukleinske kiseline.
10. Safranin:
Vrsta: Osnovna boja.
Upotreba: Koristi se kao kontrastana u gram bojenju za bojanje gram-negativnih bakterija.
Ovo je samo nekoliko primjera, a postoje mnoge druge specijalizirane mrlje koje se koriste u specifične svrhe u mikroskopiji, poput posebnih mrlja za vezivna tkiva, živčanih vlakana ili specifičnih staničnih struktura. Izbor mrlja ovisi o vrsti uzorka i informacijama potrebnim iz mikroskopskog pregleda.
Koraci bojenja mikroskopom
1. Započnite pripremom mokrog klizača, postavljajući svoj uzorak na čistom klizaču mikroskopa.
2. Pomoću kapice ili pipete pažljivo prikupite kapljica odabrane mrlje.
3. Stavite ovu kap mrlje na vanjski rub pokrova, osiguravajući da kontaktira rub klizača.
4. Da biste olakšali ravnomjernu raspodjelu mrlje, postavite komad ubrusa ili papirnati ručnik uz suprotnu stranu pokrova, pritiskajući ga čvrsto na rub.
5. Ako je potrebno, primijenite dodatni pad mrlje kako biste zajamčili potpunu pokrivenost vašeg uzorka.
6. Vaš je slajd sada u potpunosti pripremljen za promatranje pod mikroskopom.
